徠卡生物顯微鏡——冷凍斷裂裝置
徠卡生物顯微鏡的斷裂在特殊的冷凍斷裂儀中進(jìn)行。冷凍斷裂儀有多種商品出售，其復(fù)雜程度也有很大差別，但原理都是相同的，它們都是一個真空噴鍍儀和一個冷凍斷裂裝置組成的。現(xiàn)以本室的日立HHS一5GB冷凍斷裂儀為例說明其原理。
徠卡生物顯微鏡的冷凍斷裂裝置。其主要部件有兩個：刀座和樣品座，均由導(dǎo)熱良好的銅制成。刀座上安置一刀片，它可沿樣品座上的導(dǎo)軌順斜面下滑。樣品座上可安放樣品杯。當(dāng)拉動塑料支撐塊時，刀座下滑，將樣品切斷。在刀座上方與前方各有一孔，供噴鉑與噴碳用。樣品座上可裝上蝕到加溫器，使樣品升溫。刀座前還有一隔熱板，以阻擋噴鍍時的熱輻射。為保證整個裝置有良好的導(dǎo)熱、滑動與切斷性能，每次使用前均應(yīng)認(rèn)真擦拭，除去上面的油污、水份和氧化層。必要時可用拋光膏，丙酮清洗表面。
徠卡生物顯微鏡使用時，將刀座和樣品座置入液氮中冷凍待液氯停止沸騰后，取出，并在室溫下迅速將經(jīng)過冷凍的樣品連同樣品杯一‘起裝到樣品座亡，再將刀座放在樣品座導(dǎo)軌上方，下面墊以塑料文撐塊，插攢舶入隔熱板，然后將整個裝置再次故人液氮冷卻。待液氯沸騰停止，立即提出，放到真空明鍍儀的噴鍍臺上，技上支撐塊的拉繩，接通溫度控制器，蓋放真空罩開始抽真空。
徠卡生物顯微鏡真空噴銨儀內(nèi)的真空度達(dá)到樣品溫度時，通過快門把手迅速拉動真空罩內(nèi)的支撐塊，刀座即從樣品座的斜面上滑下，并將樣品切斷，在樣品杯內(nèi)留下一個帶裂面的樣品。
有時徠卡生物顯微鏡需要研究腹表面的結(jié)構(gòu)，這就要使樣品慢慢升溫，令冰升華，把膜內(nèi)外表面暴露出來，這一過程稱為蝕到。蝕刻速度與溫度和真空度有關(guān)。具體作法是，在樣品斷裂后．在的真空度下，用蝕刻加溫器使樣品溫度慢慢升至，并在該條件下維持3一10分鐘。
徠卡生物顯微鏡的斷裂或蝕刻后的樣品均需噴鍍。噴鍍的目的是在暴露的樣品表面造成一個連續(xù)的，具有足夠反差并富有立體感的薄膜，印制備樣品表面的復(fù)型。
徠卡生物顯微鏡噴鍍分兩步進(jìn)行。先在與樣品成45。A的方向通過噴鉑孔噴鍍。為此，先要在的真空度下，使帶有鑰珠的碳棒預(yù)熱，再加大電流使鉑在2—3秒鐘內(nèi)熔融氣化，當(dāng)剛剛出現(xiàn)碳花時，即終止通電。第：：步為噴碳，其噴鍍方向與樣品表面垂直。每次噴碳時間為1秒，總計可噴4—5次。每次間隔3—4秒。間歇噴碳的目的是防止樣品因過熱而發(fā)生蝕刻。噴碳是為了在樣品表面形成一個連續(xù)的膜。噴鉑與噴碳的方向。
以上所述的徠卡生物顯微鏡冷凍超薄切片制備法適用于形態(tài)，細(xì)胞化學(xué)或免疫標(biāo)記研究。制備過程中樣品要通過一系列的水溶性介質(zhì)，可稱為濕法。濕法會使樣品中的可溶性成份流失，因此不能用于這些成份的研究。為研究紹胞中的可擴散的，水溶性成份，應(yīng)當(dāng)使用于法制備超薄切片。
